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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 犬布氏杆菌PCR检测试剂盒价格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7741 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
氘代酮(0.60mlx10)Tyk2 (D4I5T) Rabbit mAb3,5-二氟
氘代酮(10g )ADAM10 Antibody甲脒基哌-1-甲酸叔丁酯
氘代酮(10g )Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)2-溴-1,二甲
氘代酮(25g )MLL1 (D6G8N) Rabbit mAb (Carboxy-rminal Antigen)溴-氟甲酸
氘代酮(25g )Girdin Antibody二二邻羟基大酸铁钠
氘代吡啶(0.5 ml x 10 )NFAT1 (D43B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)7-基吲哚啉
氘代吡啶(0.5 ml x 10 )Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb2,4,5-三氟磺酰
氘代吡啶(0.6 ml x 10 )Phospho-ULK1 (Ser757) (D7O6U) Rabbit mAb卡维地洛
氘代吡啶(10 g )Phospho-ULK1 (Ser638) (D8K9O) Rabbit mAb5-甲氧基-2-甲基-吲哚酸
氘代吡啶(25 g )Color-coded Prestained Proin Marker羧基-5-酸
氘代吡啶(25 g )SimpleChIP® DNA Purification Buffers and Spin Columns盐酸达泊西汀
氘代吡啶(50 g)SGLT2 Antibody1-甲基-三氟甲基-1H-吡唑-羧酸酯
氘代盐酸(5g )Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb (IHC Formulad)硫代酸糠酯
氘代盐酸(5g )N-Cadherin (13A9) Mouse mAb氨基--5-溴吡啶
氘代盐酸(10g)CYP11A1 (D8F4F) Rabbit mAb氟-甲
氘代盐酸(10g)Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) MultiMab™ Rabbit mAb mix (Biotinylad)6-基-2-萘酚
氘代盐酸(50g)Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb1-溴-氟萘
氘代盐酸(50g)Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAb6-氨基-基酚盐酸盐
二羟基赖正己氨酸(DHLNL)ELISA试剂盒HIRA/DGGR1 组蛋白替换精蛋白DGGR1100 ul
二酸腺苷(ADP)ELISA试剂盒Histone H3 组蛋白3100 ul
二酸尿核苷葡糖酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)ELISA试剂盒Phospho-Histone H3 (Ser10) 酸化组蛋白320 ul
二氧化酶(DAO)ELISA试剂盒Phospho-Histone H3 (Ser28) 酸化组蛋白3100 ul
儿茶酚抑素ELISA试剂盒Phospho-Histone H3 (Thr11) 酸化组蛋白31 Kit
儿茶酚(CA)ELISA试剂盒Phospho-Histone H3 (Thr3) 酸化组蛋白3100 ul
鹅膏蕈ELISA试剂盒Histone H1 组蛋白H120 ul
多药耐药相关蛋白(MRP)ELISA试剂盒phospho-Histone H1 (Thr146) 酸化组蛋白H1100 ul
多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒Acetylation-Histone H1b(Lys53) 酰化组蛋白H1b100 ul
犬布氏杆菌PCR检测试剂盒价格人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA试剂盒英文名称:Human matrix metalloproteinase 11,MMP11 ELISA Kit 进口/原装
人基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒英文名称:Human Matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA Kit *
人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒英文名称:Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA Kit 进口/原装
人基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA试剂盒 英文名称:Human Matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA Kit 进口/分装
人基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒英文名称:Human matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit *
人基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒英文名称:Human matrix metalloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit 进口/原装小鼠甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒 组装/原装
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。