注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
化铵(>99%,BR)IL-2Rα/CD25 (D6K5F) Rabbit mAb6-甲基烟酰

十二水合硫酸铁铵(>98%,BR)LXR-β (D6M9D) Rabbit mAb5-尿苷

钼酸铵四水Spartin AntibodyN-1-Boc-N-Cbz-2-哌甲酸

硫酸镍铵六水(>98%,BR)Asymmetric Di-Methyl Arginine Motif [adme-R] MultiMab™ Rabbit mAb mix(S)-2-甲基吡咯烷

钼酸铵(>96.5%,BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser5) (D9N5I) Rabbit mAb2-氨基-5-溴吡啶-羧酸

酸氢铵钠(>98%,BR)Rad23B (D4W7F) Rabbit mAb5-噻唑-2-磺酰

丁二酸铵(>98%,BR)RIP3 (E1Z1D) Rabbit mAb苄

硫代硫酸铵IFITM2 Antibody2-氟-5-三氟甲酸

盐酸氨啉(>99%,BP)Afadin (D1Y3Z) Rabbit mAb二甲氨基

[N-(1,1-二甲基-2-羟基)]氨基-2-羟烷磺酸钠盐(>98%,BP)TRIB2 (D8P2X) Rabbit mAb氨基异丁酸水合物

对甲氧基甲(>97%,BR)Acetyl-Histone H4 (Lys16) (E2B8W) Rabbit mAb对羟基肉桂酸酯（顺反混合物）

锑(>98%,BR)Non-phospho (Active) β-Canin (Ser33/37/Thr41) (D13A1) Rabbit mAb (PE Conjuga)-1-

五(>99%,BR)DAX1 (D2F1) Rabbit mAb叔丁氧羰酰基正缬氨酸

过硫酸铵PVR/CD155 (D3G7H) Rabbit mAb6-溴-2-萘甲酸

甲亚盐(>95%，BR)Phospho-Rpb1 CTD (Ser2/Ser5) (D1G3K) Rabbit mAb2-溴-吡啶甲

天青C(>50%,BS)Griess Reagent Nitri Measurement Kit异丁酸橙花酯

酸钡一水(>99%,BR)Prolactin Receptor (D4A9) Rabbit mAb甲氨蝶呤

硫酸钡(>98%,BR)Mios (D12C6) Rabbit mAb1,5-二氟-2,二

谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)ELISA试剂盒GP65/SDFR1/NPTN  间质细胞衍化因子受体1100 ul

谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)ELISA试剂盒GPA33  糖蛋白A33100 ul

孤腓肽(OFQ/N)ELISA试剂盒GNLY/NKG5  颗粒溶素100 ul

钩端螺旋体IgM(Lebtospira)ELISA试剂盒GPNMB/Osoactivin  GPNMB100 ul

钩端螺旋体IgG(Leptospira)ELISA试剂盒glypican 1  脂酰基醇蛋白聚糖-1100 ul

弓蛔虫(Tc)(IgG)ELISA试剂盒glypican 3/GPC3  脂酰基醇蛋白聚糖-320 ul

庚型肝炎病毒(IgM)ELISA试剂盒Glypican 4  脂酰基醇蛋白聚糖-4100 ul

庚型肝炎病毒(HGV)抗原ELISA试剂盒Glycodelin A/PP14  胎盘蛋白14100 ul

庚型肝炎病毒(HGV)(IgG)ELISA试剂盒Glucocorticoid receptor  糖皮质激素受体100 ul
破伤风芽孢梭菌PCR检测试剂盒说明书红细胞生成素受体抗体1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑别名：分子式：C8H12N2

酪氨酸蛋白激酶A4受体抗体(1R,2S)-2-Ami-1,2-diphenylethal中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇别名：分子式：C14H15

表皮生长因子受体3抗体5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺别名：分子式：C9H10N2S

蛋白激酶R抗体Acyclovir中文名：阿昔洛韦别名：分子式：C8H11N5O3

EHM2蛋白抗体5-Ami-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one中文名：5-氨基苯并咪唑酮别名：分子式：C7H7N3O
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。