详情介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 牛特定基因序列PCR检测试剂盒规格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7716 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
1-甲基咪唑(>98%,BR)LIMD1 Antibody(R)-2-氧代四-基氨酸苄酯
1-基咪唑(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-甲氧基-N-
1-萘(>98%,BR)T7-Tag (D9E1X) XP® Rabbit mAb2-溴吡啶-酸
酸-1-萘酯(>98%,BR)Phospho-CDC37 (Ser13) (D8P8F) Rabbit mAb2,3,5-三-吡啶甲
二十八烷(>98%,BR)GPNMB (E1Y7J) Rabbit mAb3,二氟酸
1-基-5-巯基四氮唑(>98.5%,BR)SignalSilence® MUC1 siRNA I2--5-吡啶
新戊二(>98%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb阿德福韦
2,2-二甲基琥珀酸(>99%,BR)Claudin-1 (D5H1D) XP® Rabbit mAb2--氟
2,4,5-*氧基甲(>99%,BR)CtBP2 Antibody2--三氟甲酸
三溴酚(>98%,BR)Estrogen Receptor α (D6R2W) Rabbit mAb苄基缩水甘油
2,4,6-三(二甲氨基)酚(>95%,BC)SignalSilence® GRB2 siRNA IO-(2,4,6-三磺酰基)酰羟肟酸酯
2,二甲基(>98%,BR)PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)-1,3,4,5-四氢-2H-1-并氮杂卓-2-酮
2,二甲(BR)PSMB6 (E1K9O) Rabbit mAb-甲基吡啶
2,7-二羟基萘(>98%,BR)ATPIF1 (D6P1Q) XP® Rabbit mAb氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶
2, 6-二醌-亚(>98%,BR)BAP1 (D7W7O) Rabbit mAb辛硫
2-金刚烷(>99%,BR)Atg13 (D4P1K) Rabbit mAb2-氟-6-氨基嘌呤
2-金刚烷酮(>99%,BR)PathScan® Total Ezh2 Sandwich ELISA Kit3,5-二肼盐酸盐
2-氨基-甲酸(>98%,BR)Phospho-Merlin (Ser518) (D5A4I) Rabbit mAb2,二-6,7-二氢噻吩[3,2-D]嘧啶
汉坦病毒(HV)(IgM)ELISA试剂盒CXCR3/CD183 细胞表面趋化因子受体3400 ul
含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒CXCR3/CD183 细胞表面趋化因子受体3100 ul
含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA试剂盒CXCR5/CD185 细胞表面趋化因子受体5300 ul
含SET域4(setd4)ELISA试剂盒Gastrin 胃泌素10 mg
含patatin样脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA试剂盒Gastrin 胃泌素/蛙皮素100 ul
过氧化脂质(LPO)ELISA试剂盒Gastrin receptor 促胃泌素受体20 ul
过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒GATA-3 GATA结合蛋白3100 ul
过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)ELISA试剂盒GATA-4 GATA结合蛋白4400 ul
过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒GATA-5 GATA结合蛋白5100 ul
牛特定基因序列PCR检测试剂盒规格髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗体Ditryptophenaline中文名:别名:分子式:C42H40N6O4
腺瘤样息肉抗体Tyramine中文名:酪胺别名:分子式:C8H11
腺苷酸环化酶1抗体Lucidioline中文名:别名:分子式:C16H252
雄激素受体相关蛋白24抗体Coulteropine中文名:别名:分子式:C21H216
淀粉样肽前体蛋白抗体(C端)Victoxinine中文名:别名:分子式:C17H29