详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 牛流行热病毒PCR检测试剂盒厂家 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7714 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
1,二甲氧基(>98%,BR)V5-Tag (D3H8Q) Rabbit mAbFmoc-D-基氨酸
1,烷磺内酯(>98%,BR)ThPOK (D9V5T) Rabbit mAb(羟基基)环己酮
1,3,6-双脱水甘露(>98%,BR)CRABP1 (D5W9A) Rabbit mAbD-焦谷氨酸酯
1,环己二酮(>98%,BR)PSMB7 (E1L5H) Rabbit mAb1,2-环氧-基环己烷
1,二氨基蒽醌(>90%,BS)CD71 (D7S5Z) Rabbit mAb2-甲氧基
1,二羟基蒽醌(>96%,BR)ZSTK474甲磺酰
对二甲氧基(>98%,BR)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)双水杨酸酯
1,5-二氨基萘(>98%,BR)IGFBP3 Antibody尼泊金丁酯钠盐
1,5-二羟基萘(>97%,BR)Symmetric Di-Methyl Arginine Motif [sdme-RG] MultiMab™ Rabbit mAb mixN-Cbz-L-高丝氨酸内酯
1,6-二羟基萘(>98%,BR)Phospho-Stat4 (Tyr693) (D2E4) Rabbit mAb (PE Conjuga)基酸
1,8-辛二(>98%,BR)AD3 Antibody4,6-二-5-(2-甲氧基氧基)-2,2'-二嘧啶
1-萘酮(>95%,BR)NIPSNAP1 (D1Y6S) Rabbit mAb2-酰-5-溴吡啶
1-溴金刚烷(>99%,BR)Phospho-α-E-Canin (Ser655/Thr658) Antibody炔
基硫脲(>98%,BR)T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb2-氨基酚-5-(N,N-二甲基)磺酰
1-溴烷(>97%,BR)T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAb3,二-1,2,5-噻二唑
溴代庚烷(>98%,BR)DCP1B (D2P9W) Rabbit mAb1,2-辛二
1-溴代萘(>98%,BR)CD46 (D6N7H) Rabbit mAb-6-基哒
溴辛烷(>98%,BR)Kinectin 1 (D5F7J) Rabbit mAb2,二氨基甲硫酸盐
核糖体蛋白S9(RPS9)ELISA试剂盒Galanin 神经节肽100 ul
核糖体蛋白S25(RPS25)ELISA试剂盒Galectin 3 半糖凝集素3100 ul
核糖核酸抑止剂(RNH1/PRI/RNH)ELISA试剂盒Galectin 半糖凝集素20 ul
核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族,(肝脏,嗜酸性粒细胞源性神经毒素)(RNASE2)ELISA试剂盒GAP43 神经生长相关蛋白43100 ul
核糖核酸酶(RNASE1/RIB1/RNS1)ELISA试剂盒phospho-GAP43(Ser41) 酸化神经生长相关蛋白43100 ul
核仁纤维蛋白(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA试剂盒GAPDH 3-酸甘油脱氢酶(兔来源免疫组化用)100 ul
核基质蛋白22(NMP-22)ELISA试剂盒GAPDH 3-酸甘油脱氢酶(兔来源免疫组化用)100 ul
核黄素激酶(RFK)ELISA试剂盒GAPDH 3-酸甘油脱氢酶(兔来源免疫组化用)100 ul
和肽素(copeptin)ELISA试剂盒GAI3 抑制型G蛋白α3100 ul
牛流行热病毒PCR检测试剂盒厂家高尔基体外周膜蛋白p65抗体Deoxycholic acid中文名:去氧胆酸别名:分子式:C24H40O4
糖基转移酶GLT8D2抗体Timosaponin AIII中文名:知母皂苷AIII别名:分子式:C39H64O13
γ谷氨酰半胱氨酸合成酶抗体(γ-GCSc)Diosgenin中文名:薯蓣皂苷元别名:分子式:C27H42O3
GCOM1蛋白抗体Sarsasapogenin中文名:菝葜皂苷元别名:分子式:C27H44O3
葡萄糖果糖还原酶2抗体Makisterone A 20,22-moacetonide中文名:别名:分子式:C31H50O7