注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
化铅(>99%,BR)Myosin Light Chain 2v (D5I1C) (Cardiac Isoform) Rabbit mAb (Rodent Specific)-2-酚

柠檬酸锂四水(>98%,BR)SMN1 (2F1) Mouse mAb2-萘甲酸

甲基伞形酮酰-beta-D-吡喃糖苷TMEM49/VMP1 (D6N4G) Rabbit mAbN-(5-氨基-2-基)-(吡啶基)-2-氨基嘧啶

甲基伞形酮酰-Β-D-吡喃葡糖酸苷Filamin B (D7E4W) Rabbit mAb6--甲基尿嘧啶

甲基伞花基酸钠三水Catalase (D4P7B) XP® Rabbit mAb2-甲基-羟基甲

萘(>98%，BC)Catalase (D4P7B) XP® Rabbit mAb四二二对甲磺酸酯

对氨基酚(>98%,BR)Mannose Receptor Antibody2,6-二羟

1,双(5-基-2-噁唑基)(>98%,Scint Grade)PSMD10/Gankyrin Antibody5-丁基噁唑-2,二酮

溴酸(>98%,BC)Epothilone B2-巯基噻唑啉

氟化(>98%,BR)MSH6 (3E1) Mouse mAb-溴

2,5-二基恶唑(>98%,BC)β-Amyloid (1-40 Specific) (D8Q7I) Rabbit mAb2-氨基-三氟甲酸

酸钠(>98%,BR)UBE2T (D2L7H) Rabbit mAb苄氧酸

司班60Spry1 (D9V6I) Rabbit mAb(S)-S-哌啶-甲酸盐酸盐

二氧化钛(>99%,BR)Atg5 (D5F5U) Rabbit mAbNε-(叔丁氧羰基)-Nα-苄氧羰基-L-赖氨酸

三基(>98%,BR)Atg5 (D5F5U) Rabbit mAb2-氨基-5-(三氟甲氧基)甲酸

曲拉通X-405(69.0~71.0%)Vatalanib2,二-5-硝基-6-甲基嘧啶

尿胰蛋白酶抑制剂RKIP (D42F3) Rabbit mAb5--并噻吩

氧化锌(>98%,BC)Phospho-YAP (Ser127) (D9W2I) Rabbit mAb溴-1-并呋喃

基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766)  酸化性成纤维细胞生长因子受体1100 ul

基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒FGFR2/CD332  成纤维细胞生长因子受体21 Kit

基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA试剂盒FGFR3/CD333  成纤维细胞生长因子受体3100 ul

基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒FGFR4/CD334  成纤维细胞生长因子受体4100 ul

基质金属蛋白酶7(MMP-7)ELISA试剂盒FGL2  凝血酶原酶100 ul

基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒Fibulin 1  “衰老关键蛋白”100 ul

基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒Fibulin 5  “衰老关键蛋白”100 ul

基质金属蛋白酶3/基质裂解素1(MMP3/STR1)ELISA试剂盒human Fibrinogen  可溶性纤维蛋白原100 ul

基质金属蛋白酶25(MMP25)ELISA试剂盒human Fibrinogen  纤维蛋白原100 ul
牛白血病病毒PCR检测试剂盒规格蛋白激酶B3Peiminine中文名：贝母素乙别名：Verticine; 浙贝乙素分子式：C27H433

肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体Imperialine中文名： 西贝素别名：Sipeimine分子式：C27H433

粘附相关激酶抗体Peimine中文名：贝母素甲别名：Verticine; 浙贝甲素分子式：C27H453

磷酸化粘附相关激酶抗体N-Methylflindersine中文名：别名：分子式：C15H152

磷酸化活化转录因子4抗体Evodiamine中文名：吴茱萸碱别名：(+)-Evodiamine分子式：C19H17N3O
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。