注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
纤维素酶(酶活>45 U/mg)Phospho-EphA2 (Tyr588) (D7X2L) Rabbit mAb苄基吗啉-2-甲

化十六烷基吡啶一水(分子生物学级)SignalSilence® γ-Canin siRNA II (Mouse Specific)(R)-哌-2-羧酸

醋酸铅三水(>99%，BC)MDR1/ABCB1 (D3H1Q) Rabbit mAb2-溴-氨基-6-甲基吡啶

派洛宁Y(Ind Grade)AFAP1L2/XB130 (D1B5) Rabbit mAb双酚酸

对羟基甲酸钠(>99%,BR)Phospho-MCM3 (Ser112) (D3S4M) Rabbit mAb2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,四甲基脲四氟酸盐

鱼精蛋白硫酸盐来源于鲑鱼 VEGF Receptor 2 (D5B1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)羟基-三氟

5-溴--吲哚基酸盐钠盐(分子生物学级)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)甲基-酮基-N-基戊酰

酸铜水合物(>99%，BR)xCT/SLC7A11 (D2M7A) Rabbit mAb甲基-5-

酸肌酸钠盐四水SignalStain® Apoptosis (Cleaved Caspase-3) IHC Dection Kit3,5-二氟-基酚

3,3'-二氨基联四盐酸二水(>99%，BR)Phospho-Akt (Ser473) (D9W9U) Mouse mAb3,5-二氟酮

1,6-二酸果糖三钠盐(98-101.0%，BR)Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) MultiMab™ Rabbit mAb mix (HRP Conjuga)2-甲基戊

1,6-二酸果糖三钠盐(98-101.0%，BR)β-Arrestin 1 (D8O3J) Rabbit mAb对基酚

铵(>99%，BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb2-(甲基氨基)基氨酸叔丁酯

四甲基对(>99%，BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb1-Boc-吡咯烷甲酸甲酯

1,3,5-三羟基二水合物(>98%，BR)XPC Antibody4,二氟环己甲酸

碳酸无水(>98%，BR)XPC AntibodyFmoc-L-谷氨酸-α-苄酯

牛磺酸(>98.5%，JP )Prosta Specific Membrane Antigen (D4S1F) Rabbit mAb氨基-6--1,二磺酰

草酸铵(98~101%,BR)IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb正戊(烷)基酸

山羊白介素6(IL-6)ELISA试剂盒phospho-ERK1/MAPK-1/2(Thr183/185)  酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2100 ul

山羊白介素4(IL-4)ELISA试剂盒phospho-ERK1(Thr202/Tyr204)  酸化丝裂原活化蛋白激酶1100 ul

山羊白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒ERK1/2(p44/42 MAPK)  丝裂原活化蛋白激酶1/2100 ul

山羊白介素2(IL-2)ELISA试剂盒phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204)  酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2100 ul

山羊白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185)  酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2100 ul

山羊白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒phospho-ERK1(Thr197/Thr202)  酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2100 ul

山羊白介素18(IL-18)ELISA试剂盒Eph receptor B2/Ephb2   Ephb21 Kit

山羊白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒ERK1/MAPK3  丝裂原活化蛋白激酶3100 ul

山羊白介素10(IL-10)ELISA试剂盒MAPK4  丝裂原活化蛋白激酶4100 ul
木瓜PCR检测试剂盒厂家电压依赖性钙通道CACNA1G+CACNA1H抗体Isoferulic acidCAS .：25522-33-2别名：trans-3-Hydroxy-4-methoxycinnamic acid分子式：C10H10O4性状：Powder

钙结合蛋白1抗体threo-1-C-Syringylglycerol中文名：别名：分子式：C11H16O6

神经型一氧化氮合成酶结合蛋白抗体Coniferaldehyde中文名：松柏醛别名：4-Hydroxy-3-methoxycinnamaldehyde分子式：C10H10O3

毒蕈碱型乙酰胆碱受体M4抗体Sinapaldehyde glucoside中文名：芥子醛葡萄糖苷别名：Sinapaldehyde 4-O-β-D-glucopyraside分子式：C17H22O9

甘氨酸结合蛋白抗体Hexacosyl (E)-ferulate中文名：别名：分子式：C36H62O4
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。