注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
柠檬酸一水Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb二氨

SalubrinalCalreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb溴甲基-甲酸

酸伯安喹；酸伯氨喹IL-2 (D7A5) Rabbit mAb2-氨基-甲

D-荧光素,虫荧光素SignalSilence® SirT1 siRNA IN,N-二甲基酰

麻保沙星;马波沙星IL-1β (3A6) Mouse mAb硝基吡唑

MK0677，伊布莫仑甲磺酸盐Drebrin A Antibody2,二氟甲

琼脂粉Di-Methyl-Histone H3 (Lys27) (D18C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)溶剂橙 2

三氟胸苷;三氟尿苷(TFT) TPX2 (D2R5C) XP® Rabbit mAb4,4'-二氟甲哌

四水合辅羧酶;四水合硫焦酸酯Skp1 (D3J4N) Rabbit mAb间二氟甲氧基溴

甲磺酸加替沙星Phospho-M-CSF Receptor (Tyr699) (D10B11) Rabbit mAb6-溴-2-吡啶甲酸甲酯

盐酸哌罗匹隆CPT1A (D3B3) Rabbit mAb2-溴-5-甲基三氟甲

替拉扎明Plectin-1 (D6A11) Rabbit mAb2-甲基-(三氟甲基)苄基溴

糊精;白糊精Lamin B2 (D8P3U) Rabbit mAb溴代苄盐酸盐

盐酸苄达明SignalSilence® c-Raf siRNA I-2-氟酚

葡聚糖凝胶G-50;交联葡聚糖G-50(中颗粒)E2A (D2B1) Rabbit mAb三基亚正基酸甲酯

葡聚糖凝胶G-50;交联葡聚糖G-50(粗颗粒)TAP2 Antibody2-溴基基

L-(+)-扁桃酸;S-扁桃酸Bcl-xL Blocking Peptide6-溴-1,并恶烷

D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸β-Actin (8H10D10) Mouse mAb (HRP Conjuga)2-氨基-4,5-二氟甲酸

兔白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒DAPK3  凋亡相关蛋白激酶3100 ul

兔白蛋白(Albumin)ELISA试剂盒Delx-1  DTX1300 ul

兔阿霉素(ADR)ELISA试剂盒envelope glycoproin (Dengue virus type-2)  登革热病毒400 ul

兔γ-谷氨酰转移酶1(GGT1)ELISA试剂盒polyproin (DHAV)  鸭甲型肝炎A病毒100 ul

兔β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒Desmin  结蛋白100 ul

兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒DIO2  脱酶2100 ul

兔S100-A5蛋白(S100A5)ELISA试剂盒DISC1 (CT)  DISC1 C端100 ul

兔P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒DISC1(NT)  DISC1 N端1 Kit

兔p物质(SP)ELISA试剂盒DLK1  穿膜蛋白DLK1100 ul
马传染性贫血病毒PCR检测试剂盒厂家E2 tag标签抗体2-Amithiazol-4-acetic acid中文名：2-氨基噻唑-4-乙酸别名：分子式：C5H6N2O2S

铁螯合酶抗体Ampicillin Trihydrate中文名：氨苄西林三酸别名：分子式：C16H19N3O4S

DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体2-Acetylthiophene中文名：2-乙酰基噻吩别名：分子式：C6H6OS

表皮生长因子抗体（人）2-Acetylfluorene中文名：2-乙酰芴别名：分子式：C15H12O

上皮细胞粘附分子抗体1,2,3,4-Tetrahydro-1-acetylquiline中文名：1,2,3,4-四氢-1-乙酰基喹啉别名：分子式：C11H13
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。