注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
熊果酸Bcl-xL (54H6) Rabbit mAb (APC Conjuga)红色基ITR(氨基-甲氧基-N,N-二基磺酰)

熊果酸；乌苏酸(标准品)Aurora A (1F8) Mouse mAb5-溴-2,二吡啶

香叶木素SGK1 (D27C11) Rabbit mAb1-氨基-1-环丁基羧酸盐酸盐

香叶木素（标准品）SignalSilence® SP1 siRNA I氨基-3,5-二吡啶

金雀花,野靛Bak (D4E4) Rabbit mAb(R)-吲哚啉-2-羧酸

金雀花,野靛（标准品）Bak (D4E4) Rabbit mAb间三氟酚

厄贝沙坦SignalSilence® SP1 siRNA II2-氨基-磺酰基酚

5'-O-(4,4'-二甲氧基三基)-胸苷-3'-O-丁二酸Bora (D2B9) Rabbit mAb(叔丁氧羰基氨基)吡啶

水杨苷Phospho-MEK1/2 (Ser221) Blocking Peptide2,二-5-甲氧基

水杨苷(标准品)Phospho-MERIT40 (Ser29) Antibody砜

厚朴酚PathScan® Phospho-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) Chemiluminescent Sandwich ELISA Kit2'-氟-4'-羟基酮

厚朴酚(标准品)ITCH (D8Q6D) Rabbit mAb(1S)-1-(2R)-环氧基-2-基氨酸叔丁酯

埃索美拉唑镁(三水)Bcl-11B (D6F1) XP® Rabbit mAb1-N-Boc-氧代-哌啶羧酸酯

芦丁/芸香叶苷Bcl-11B (D6F1) XP® Rabbit mAb1-Boc-哌啶酮

芦丁/芸香叶苷(标准品)Lapatinib2-萘甲酰

新橙皮苷二氢查尔酮WIPI1 Antibody2,二-5-硝基吡啶

新橙皮苷二氢查尔酮(标准品)Phospho-ALK (Tyr1078) (D28B4) Rabbit mAb5-溴-2-吡啶

氧化苦参SignalSilence® Cbl-b siRNA I2-溴-5-硝基-6-甲基吡啶

1,25二羟基维生素D3(1,25 DHVD3)ELISA试剂盒DRD5/Dopamine Receptor D5  多巴受体D5100 ul

兔ELISA试剂盒DBC1  膀胱癌缺失基因1100 ul

兔胶原吡啶交联(PYD)ELISA试剂盒Phospho-DBC1 (Thr454)  酸化膀胱癌缺失基因1100 ul

兔降钙素原(PCT)ELISA试剂盒DBH  多巴β羟化酶100 ul

兔降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒DCC  结肠直肠癌缺失基因100 ul

兔甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒DCIR/CLEC4A  C型凝集素结构域家族4成员A100 ul

兔基质细胞衍生因子-1(SDF-1/CXCL12)ELISA试剂盒DCN/Decorin   核心蛋白聚糖100 ul

兔基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒CLEC5A/MDL1  C型凝集素结构域家族5成员A100 ul

兔基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒LAMP-3/DC-LAMP/CD208  CD20820 ul
绿脓杆菌PCR检测试剂盒说明书钙通道电压依赖性β1蛋白抗体Bergapten中文名：佛手柑内酯别名：分子式：C12H8O4

酸性线粒体肌酸激酶抗体Angelicin中文名：别名：分子式：C11H6O3

肌肽二肽酶1抗体Psoralen中文名：补骨脂素别名：分子式：C11H6O3

胶原样蛋白抗体Fraxidin中文名：嗪皮啶别名：分子式：C11H10O5

20号染色体开放阅读框72抗体Agrimolide中文名：仙鹤草内酯别名：分子式：C18H18O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。