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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 流行性腮腺炎病毒PCR检测试剂盒规格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7668 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
春雷霉素;春日霉素; 克死霉SSTR1 Antibody6-靛红
土拉霉素A,托拉菌素A,泰拉霉素WBP2 Antibody靛红
土拉霉素A(标准品)USP8 (D18F6) Rabbit mAb氨基丁缩二
拉氧头孢钠FGF Receptor 2 (D4H9) Rabbit mAb2-甲基-6-喹啉羧酸
原花青素Cell Fractionation Antibody Sampler Kit2-溴-5-甲氧基酚
原花青素(标准品)HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjuga)肼盐酸盐
胡椒GST (26H1) Mouse mAb (Magnetic Bead Conjuga)邻酰氨基对酚
胡椒(标准品)Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb (Magnetic Bead Conjuga)对
纽莫康定B0(肺囊康定) PAX5 (D19F8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)甲基-2-酸酯
福莫特罗 p21 Waf1/Cip1 (12D1) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)甲酸正戊酯
溴甲后马托品Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)1-CBZ-哌啶酸
酸阿比特龙酯PhosphoPlus® EGFR (Tyr1068) Antibody Duet5-溴-8-硝基异喹啉
溴莫尼定 PSMA2 (D3A4) Rabbit mAb邻三氟甲氧基
磺草灵Phospho-Bad (Ser112) (40A9) Rabbit mAb (PE Conjuga)羟基哌啶盐酸盐
磺草灵(标准品)NBC1/SLC4A4 AntibodyN-甲基对甲磺酰
磺酸贝托司汀Phospho-GIT2 (Tyr392) (D8N9A) Rabbit mAb2,6-二-
叶绿素铜钠盐Upf2 (D3B10) Rabbit mAb2-氟-5-
新绿原酸(标准品)UBE2S (D5H9H) Rabbit mAb邻溴三氟甲氧基
DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶3A(DNMT3A)ELISA试剂盒CSP 环子孢子蛋白(约氏疟原虫)100 ul
DNA(胞嘧啶-5)甲基转移酶1(DNMT1)ELISA试剂盒C-SKI/v-SKI C-SKI100 ul
DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA试剂盒Calcitonin 降钙素100 ul
C型钠尿肽(CNP)ELISA试剂盒Calcitonin 降钙素100 ul
C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒CTBP1 C端结合蛋白1100 ul
C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒CT DNA (calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA 1 Kit
CXC趋化因子受体4(CXCR4)ELISA试剂盒CTGF 结缔组织生长因子100 ul
CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA试剂盒CD150/SLAM 信号淋巴细胞活化分子CD150100 ul
CXC趋化因子配体16(CXCL16)ELISA试剂盒CD151/MER2/PETA-3 CD151100 ul
流行性腮腺炎病毒PCR检测试剂盒规格人强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒英文名称:Human dyrphin,Dyn ELISA Kit进口/分装
人羟基胶原吡啶交联(OH-PYD)ELISA试剂盒 英文名称:Human Hydroxy-Pyridinium crosslinks,OH-PYD ELISA Kit*
人羟赖氨酸(Hyl)ELISA试剂盒英文名称:Human hydroxylysine,Hyl ELISA Kit进口/原装
人羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒英文名称:Human hydroxyproline,Hyp ELISA Kit进口/原装
人羟脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA试剂盒英文名称:Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein,HRGP ELISA Kit*
人桥粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)ELISA试剂盒 英文名称:Human desmogleins 1,DGS-E1 ELISA Kit*小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠补体因子H(CFH)ELISA试剂盒 组装/原装