注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Boron carbide5-氯-1-戊炔 98%氟酸 49.5-50.5%溶液

Boron oxide3-氯苯乙炔 97%L-氨酰-L-谷胺酰胺 98%

Glass Fiber2-氯-6-甲氧基吡啶 97%N-氯代琥珀酰亚胺 98%

Quinacrine dihydrochloride氯甲基*基硅烷 98%肌酸，一 BR

2-Amifluorene6-氯-1-己烯 97%无肌酸 98%

2-Amipyrimidine2,5-二溴吡啶 99%肌酐 99%

5-Nitrouracil2,6-二溴吡啶 98%N,N-二甲基甘氨酸盐酸盐 99%

Antipyrine1,4-二乙炔基苯 97%三 AR,99.5%

Vaselineoil4,4'-二甲基-2,2'-联吡啶 98%N-月桂酰肌氨酸钠 98%

VaselineoilN,N'-二甲基乙二胺 96%萘甲唑啉盐酸盐 99%

Arlacel A1,8-二溴辛烷 98%钯标准溶液 1000μg/ml,溶剂:2.0 mol/L HCl

Benzil2(2-吡啶)酮 98%钯标准溶液 100μg/ml

Chrysene2,6-二叔丁基-4-甲基吡啶 98%氯化钡溶液 1mol/L(2N)

Diphenylacetylene酮基膦酸二乙酯 96%溴标准溶液 0.05000mol/L(0.1N)

Euparal1,4-二氯酞 98%硫酸铈标准溶液 0.1000mol/L90.1N

Indan2,2'-联吡啶 AR,99.0%铜标准溶液 1000μg/ml

2-氨基苯甲酰胺(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Drosophila Akt (Ser505) AntibodyIMP3/IGF-IIBP3  胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗体

羧氧基胺半盐酸盐(>98.0%(T))THEX1 (D66A11) Rabbit mAbILVBL  乙酰乳酸合成酶蛋白抗体

2-氟-1-甲基吡啶鎓对甲苯磺酸盐(>98.0%(T))Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAbILT2/CD85j  细胞表面免疫球蛋白样转录因子2抗体

1-(5-氟-2,4-二基)-4-甲基哌(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAbILP2  抑制细胞凋亡样蛋白2抗体

吉拉德试剂 P(>95.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbILK-1  整合素连接激酶-1抗体

2-肼基吡啶(>98.0%(GC)(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbILDR1  免疫球蛋白样结构域受体1抗体

2-肼盐酸盐(>98.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAbIL-9  白介素9抗体

4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量：23.50-24.30 %)Akt3 AntibodyIL-9  白介素9抗体

4-[3,5-二甲基-4-(4-硝基苄氧基)苯基]-4-氧代丁酸琥珀酰亚胺酯(>96.0%(HPLC))CT3 (D4K4N) Rabbit mAbIL-8/CXCL8  白介素8抗体

异酸对甲苯磺酰酯(>95.0%(T))Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAbIL-8/CXCL8  白介素8抗体
多瘤病毒PCR检测试剂盒价格B淋巴细胞生发中心相关蛋白抗体Ergosterol glucoside中文名：麦角甾醇葡萄糖苷别名：分子式：C34H54O6

半乳糖凝集素7抗体Phyperulide E中文名：别名：分子式：C28H40O9

肠高血糖素相关肽抗体Withalide C中文名：醉茄内酯C别名：分子式：C28H39ClO7

半乳糖凝集素8抗体Physapruin A中文名：别名：分子式：C28H38O7

半乳糖凝集素1抗体4β-Hydroxywithalide E中文名：4β-羟基醉茄内酯E别名：分子式：C28H38O8
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。