注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
2,2'-BiquilineN-苯基对苯二胺 98%环戊 Standard for GC，>99.5%（GC)

2-HydroxyquilineN-苯基对苯二胺 98%己内酰胺 色谱固定液

Copper 8-quilinate1,3-双(三氟甲基)-5-溴苯 97%2- Standard for GC（）

DMSO3,5-双(三氟甲基)苯甲酰氯 97% 癸二酸二乙酯 standard for GC

MSM3-酸 97%邻苯二甲酸二壬酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

DMSO-d6α,α,α-三氟苯乙酮 98%乙  Standard for GC, ≥99.9% (GC)

SDPα,α,α-三氟苯乙酮 99%二乙胺 超纯级,≥99.5%(GC)

Diphenyl sulfone丁炔二酸二甲酯 99%酸乙酯 GCS,≥99.5% (GC)

Sulfolane金刚烷 99.0%赤藓红B钠盐 Biological stain

n-Amyl ether2-金刚烷酮 98%曙红Y,溶 Biological stain

4,4'-Azoxyanisole环己烷甲 97%乙二缩双（邻氨基酚） 98%

BHA偶氮二甲酸二异酯 95%甘油 色谱固定液

ODA溴化镁（六） 98%正庚酸 Standard for GC

Diphenyl ether4-甲苯磺酰异酸酯 96%正庚 standard for GC, ≥98% (GC)

18-Crown-6碳酸二苯酯 99%甲基异酮 Standard for GC,>99.5% (GC)

alpha-PGME硫代乙酸铵 试剂级,70%溶液间硝苯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

亚油酸甲酯(>99.0%(GC)，标准物质)Glycogen Synthase (15B1) Rabbit mAbKIF5A/NKHC1  驱动蛋白KIF5A抗体

1-戊烯(>99.5%(GC),标准物质)NuMA AntibodyKIF4A  沉默驱动蛋白KIF4A抗体

1-己烯(>99.5%(GC),标准物质)MAGE-A3 (E9S4X) Rabbit mAbKIF3A  驱动蛋白家族蛋白3抗体

1-庚烯(>99.5%(GC),标准物质)HS1 (D83A8) XP® Rabbit mAb (Human Specific)KIF2B  有丝分裂驱动蛋白样2B抗体

1-辛烯(>99.5%(GC),标准物质)ARC (D7Q3G) Rabbit mAbKIF20A/MKLP2  有丝分裂驱动蛋白样2抗体

1-壬烯(>99.5%(GC),标准物质)Phospho-Glycogen Synthase (Ser641) AntibodyKIF1B  驱动蛋白家族成员1B抗体

1-癸烯(>99.5%(GC),标准物质)HS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb (Rodent Specific)KIF17  驱动蛋白家族KIF17抗体

1-十一烯(>99.5%(GC),标准物质)Phospho-PKC (pan) (gamma Thr514) (D6Y3D) Rabbit mAbKIF15  驱动蛋白家族成员15抗体

1-十二烯(>99.5%(GC),标准物质)Glycogen Synthase AntibodyKif14 protein  驱动蛋白家族Member14蛋白抗体

1-十三烯(>99.5%(GC),标准物质)PARN (A42) AntibodyKIF11/Eg5/TRIP5  驱动蛋白样蛋白1抗体（甲状腺激素受体相互作用蛋白5）
大豆RR/SS PCR检测试剂盒厂家GTP发育调控结合蛋白1抗体20,24-Dihydroxydammar-25-en-3-one中文名：别名：分子式：C30H50O3

细胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗体Cycloeucalel中文名：环桉烯醇别名：24-Methylene-29-rcycloartan-3β-ol分子式：C30H50O

跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体Piscidil A中文名：别名：分子式：C30H50O4

退行性精母细胞同源物1抗体Triptohypol F中文名：别名：分子式：C31H52O2

7脱氢胆固醇还原酶抗体1β,2α,3β,19α-Tetrahydroxy-12-ursen-28-oic acid中文名：别名：分子式：C30H48O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。