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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
CRHD-山梨 用于分子生物学, ≥98%氟甲基-1,1,1,3,3,3-六氟异基 98%

SAHH木糖 99%N,N`-二苯基硫脲 CP,98%

Purine-nucleoside phosphorylase雌三 USP*基乙酸 99%

ADA雌酮 97%异 98%

GAPDH雌酮 分析标准品肼 99%

3-Phosphoglyceric Phosphokinase雌二 98%乙酸异烯酯 99%

Laccase from Rhus vernificera雌二 USP级硫化锌 99.99% metals basis,3.8-4.2μm,powder

Isocitrate dehydrogenase雌二 分析标准品，99.5%二溴 99%

γ-MDH泼尼松 98%溴烷 >99.0%(GC)

Lactoperoxidase from bovine milk1,3-酮二羧酸 97%硫酸镍铵，六 CP，98.0%

Pullulanase硫酸阿托品 98.5% 苯甲酰胺 CP

Aldehyde Dehydrogenase, potassium-activated5-溴苯并[b]噻吩 98%苯甲酰胺 99%

Glycerokinase苯并噻吩 97%苯甲酰胺 99.5%，升华纯化

D-LDH二苯并噻吩 99%硫酸联氨 CP,98.0%

Lipoxidase from soybean二苯并噻吩 98%拧盖机 SG-1550型手持式

TIM二苯并噻吩 分析标准品钢板铡刀

十一烷(标准品)Akt1 (2H10) Mouse mAbNPTX2  神经细胞穿透素2抗体

十一酸(标准品)Akt1 (2H10) Mouse mAbNPTX1  神经细胞正五聚体1抗体

对二甲苯(标准品)Phospho-IGF-I Receptor β (Tyr1135/1136)/Insulin Receptor β (Tyr1150/1151) (19H7) Rabbit mAb (Biotinylated)NPRC/Natriuretic Peptide Receptor C  利钠肽受体C抗体

对二甲苯标准溶液(1.00mg/mL,基体:甲)Phospho-mTOR (Ser2448) AntibodyNPRB  利钠肽受体B抗体

间二甲苯标准溶液(1mg/ml in Methal,for Water Analysis)Phospho-mTOR (Ser2448) AntibodyNPR2L/G21 protein  G21蛋白质抗体

邻二甲苯(标准品)mTOR AntibodyNPHS2/Podocin  肾小球裂孔膜蛋白PDCN抗体

己二酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)NPFF/FMRFamide  痛觉调节肽NPFF抗体

乙酰胺(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-mTOR (Ser2481) AntibodyNPD014  1号染色体开放阅读框63抗体

蒽(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-mTOR (Ser2481) AntibodyNPC1/Niemann Pick C1  尼曼匹克C1前体蛋白抗体

茴香(Standard for GC,≥99%(GC))Phospho-mTOR (Ser2481) AntibodyNPAP1  核孔蛋白1抗体
斯氏毛滴虫PCR检测试剂盒厂家3-Chloropyridine,99%通用试剂　5G

4,6-Dichloropyrimidine,97%通用试剂　5G

4,6-Dihydroxypyrimidine,98%通用试剂　5G

2,6-Diamipyridine,98%通用试剂　25G

2,2'-Dithiodipyridine,≥99.0%通用试剂　1G

8-Hydroxyquinaldine,98%通用试剂　25G

1,2-Di(4-pyridyl)ethylene,97%通用试剂　5G

4-Hydroxypiperidine,98%通用试剂　5G

4,6-Dimethyl-2-pyrimidinethiol,98%通用试剂　10G

2-Pyridil N-oxide,≥98.0%通用试剂　25G

4-Hydroxypyridine,95%通用试剂　25G

3-Hydroxypyridine,98%通用试剂　25G

6-Propyl-2-thiouracil,98%通用试剂　25G

3,5-Lutidine,≥98%通用试剂　25ML

2,5-Lutidine,95%通用试剂　5ML