注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
 Taq DNA PolymeraseBiological stain，生化试剂级N-CBZ-羟脯氨酸甲酯 95%

Hot Taq DNA PolymeraseBiological stain，生化试剂级3-羟基-9H-占吨-9-酮 98%

Hotstart Taq DNA Polymerase龙脑 55%L-亮氨 96%

Taq plus DNA Polymerase苄基酮 98%2-甲基-6-甲酸 98%

 Pfu DNA Polymerase3-二乙氨基酚 97%5-甲氧基-2-甲酸 97%

SP6 RNA Polymerase2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉 99%L-苯氨酸叔丁酯盐酸盐 99%

T3 RNA Polymerase4-甲基-2-氧戊酸 98%N-叔丁氧羰基肌氨酸 98%

T7 RNA Polymerase苯酮酸 98%D-泛酸钙 药用级

T4 DNA Polymerase苄叉酮  >98.0%(GC)亚硫酸氢钠甲萘醌 分析标准品

T7 DNA Polymerase苄叉酮 ≥99%亚硫酸氢钠甲萘醌 95%

T4 RNA Ligase甲基烯酸二甲氨乙酯 99%烟酰胺 99%

T4 DNA Ligase帕莫酸 97%四氯苯醌 98%

TDT气相过滤器  G1544-80530四螨 分析标准品，98.6%

RAPD Primer苏丹 Biological stain3,3’-二没食子酸酯茶黄素 分析标准品, ≥98.0% (HPLC)

Random primers4-(磺酸) 97%二硫化四甲基秋兰姆 97%

β-Dextranase苄基 99%二硫化四甲基秋兰姆 分析标准品

2,2,4,4,5,5-六氯联苯(标准品)Histone H4 (L64C1) Mouse mAbNT5C2  胞浆-5´-核苷酸酶-Ⅱ抗体

环氧烷(标准品)Histone H4 (L64C1) Mouse mAbNT5C1A  胞质5'核苷酸酶1A抗体

芘(标准品)Helios (D8W4X) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)NT-4/NT-5  神经生长因子4/5抗体

苯乙烯(标准品)Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAbNT-3 proprotein  神经营养因子-3前蛋白抗体

苯乙烯标准溶液(1000μg/ml)Cyclin D3 (DCS22) Mouse mAbNT-3  神经营养因子3抗体

(-)-盐酸东莨菪碱(标准品)TP/ECGF1 AntibodyNT/NTS1/NTRH  神经降压素抗体

硫标准溶液(1000ug/ml，基体:1%HCl)Akt1 (C73H10) Rabbit mAbNSPL2/RTN3  神经内分泌特异性蛋白2抗体

质二氧化硫(甲法)（剂）标样(溶剂：0.4-0.6mg/L,分析标准品)Akt1 (C73H10) Rabbit mAbNSP5  核结构蛋白5抗体

十四烷(标准品)p58IPK (C56E7) Rabbit mAbNSP1/SH2D3A  SH2结构域蛋白3A抗体

三氯乙烯标准溶液(1000μg/ml,溶剂：甲)TNFRSF17/BCMA (E6D7B) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)NSMase2  中性鞘磷脂2抗体
木霉属通用PCR检测试剂盒厂家白介素-1受体相关激酶4抗体Dendocarbin A中文名：别名：分子式：C15H22O3

干扰素调节因子4抗体Pterosin D中文名：蕨素D别名：分子式：C15H20O3

整合素αX抗体Drim-7-ene-11,12-diol acetonide中文名：别名：分子式：C18H30O2

整合素αV抗体Epipterosin L中文名：别名：分子式：C15H20O4

白介素-17D抗体Humulene epoxide II中文名：别名：6,7-Epoxyhumula-2,9-diene分子式：C15H24O
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。