注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Boc-D-serine派洛宁Y 超级纯4-溴甲基喹啉-2-酮 97%

Nα-Boc-D-tryptophan丽春红S 分子生物学级4-二苯基苯甲酸 98%

Boc-L-valine丽春红S Biological stain盐酸林可霉素 分析标准品

Boc-D-valine蛋白酶K 用于分子生物学，≥30 units/mg protein盐酸林可霉素 95%

Z-L-Alanineβ-内酯 98%锑粉 99.5% metals basis

Z-D-alanine胃蛋白酶（猪源） 1：3000锑 CP,99.0%

Z-Gln-OH胃蛋白酶（猪源） 1：15000锑粒 99.999% metals basis,beads,1-6 mm

Z-Asn-OH嘌呤霉素盐酸盐 99%锑标准溶液 1000μg/ml,基体:6.0 mol/L HCl

CBZ-L-Phe青霉素/链霉素 组织培养级，无菌锑标准溶液 1000μg/ml,，溶剂：盐酸

Z-D-Phe-OH青霉素/链霉素/两性霉素B 组织培养级，无菌锑标准溶液 100mg/L，溶剂：1%盐酸

Z-Glu-OH青霉素/链霉素/新霉素 组织培养级锑标准溶液 100mg/L(20°C)，基体: 20%HCl

CBZ-D-Glu派洛宁B 高纯级锑标准溶液1.24±0.26mg/L

Z-L-aspartic acid胃蛋白酶抑制剂  超纯级 锑粒 99.99% metals basis

N-Cbz-D-aspartic Acid磷酰二肽 超纯级锑粒 99.9999% metals basis

CBZ-L-Arg蛋白酶抑制剂混合物 蛋白组学级氧化铋 SP

Z-DL-phenylalanine膦酰二肽钠 99%氧化铋 99.99% metals basis

圣草次苷(标准品)cdc2 (E1Z6R) Rabbit mAbp400  p400蛋白抗体

乙二乙(标准品)C/EBPalpha (p42) Antibodyp38MAPK/MAPK14/p38Alpha  丝裂原活化蛋白激酶p38α抗体

戊酸乙酯(标准品)Phospho-C/EBPα (Thr222/226) AntibodyP38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体（P-p38 MAPK）

芴(Standard for GC,≥99%(HPLC))Phospho-C/EBPα (Thr222/226) AntibodyP311 protein  神经再生相关蛋白抗体

芴(标准品)4E-BP2 AntibodyP2Y4  P2Y4受体抗体

芴甲氧羰酰氯（Fmoc-Cl）4E-BP2 AntibodyP2Y2  嘌呤ATP受体抗体

氟苯(标准品)Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)P2Y1R/P2ry1  P2Y1受体抗体/嘌呤受体抗体

氟罗里硅土(农残级)ZO-2 AntibodyP2X2/ATP receptor  嘌呤受体P2X2抗体

合成硅酸镁吸附剂(250-125um)ZO-2 AntibodyP2RX4  三磷酸腺苷门控阳离子通道蛋白抗体

戊菊酯(标准品)Vav2 (C64H2) Rabbit mAbP2RX3/ATP receptor  嘌呤受体P2X3抗体
齿垢密螺旋体PCR检测试剂盒价格Calcium pyrophosphate,≥99.9%通用试剂　10G

Calcium peroxide,75%, 100?200 mesh通用试剂　250G

Calcium hypophosphite,≥99.0%通用试剂　25G

Calcium sulfite,98%通用试剂　250G

Anhydrous gypsum,≥99.9%通用试剂　250G

Ethylenediaminetetraacetic acid calciu...通用试剂　50G

Calcium Gluconate,≥98%通用试剂　100G

Sand,99%通用试剂　50G

Calcium,99%通用试剂　5G

Calcium hydroxide通用试剂　100G

Calcium hypochlorite通用试剂　100G

Calcium phosphate mobasic,≥85%通用试剂　100G

Calcium hydrogenphosphate dihydrate,98%通用试剂　100G

Calcium phosphate,≥96.0%通用试剂　250G

Calcium iodate,98%通用试剂　25G
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。