注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Clostripain from Clostridium histolyticum二苯甲酮 99%草酸 CP，99.5%

E-64吡啶-2，3-二羧酸 99%草酸 GR，99.8%

Kallikrein from porcine pancreas吡啶-2，5-二羧酸 98%草酸 SP

Luciferase from Bacteria吡啶-3，5-二羧酸 98%草酸 99.99% metals basis

Luciferase firefly2,6-吡啶二羧酸 99%草酸 ACS

Maltose Phosphorylase聚四氟乙烯微粉 平均粒径: 5μm草酸 Standard for GC，≥99.6%

Microcococcus lysodeikticus cells葡萄糖 AR草酸 ≥99.998% (metals basis)

Mutarotase甘露 AR,98.0%草酸 ≥99.9999% (metals basis)

Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus vem甘露  超纯级，≥99.0%(HPLC)4-溴苯磺酰氯 98%

Phosphodiesterase II from bovine spleen甘露 ≥99.9999% metals basis3-环己基酸 99%

PLA2甘露 分析标准品，>99.9999%上光油铁罐(直径127mm*250mm)

PAO甘露  药用级，符合EP, FCC, USP上光油铁罐 直径73mm*高度150mm

 Protease S AureusD-山梨 AR,98.0%天然黄蜂蜡 医药级（CP2005版）

UTID-山梨 用于细胞培养，≥98%蜂蜡 46-60°C

COMT雌三 USP蜂蜡 62-67°C

Irganic Pyrophosphatase雌酮 97%天然白蜂蜡 医药级（CP2005版）

叔丁胺(standard for GC,≥99.5%(GC))iS Antibody (Mouse Specific)tch1/MOTC  跨膜受体蛋白tch-1抗体

2,3-丁二酮(standard for GC,≥99.0%(GC))mTOR (7C10) Rabbit mAbtch 2  跨膜受体蛋白tch-2抗体

癸二酸二辛酯（DOS）(Standard for GC, ≥98.5% (GC))mTOR (7C10) Rabbit mAbS-3/eS  一氧化氮合成酶-3抗体（内皮型）

溴代正丁烷(Standard for GC,>99.5%(GC))Lck (D88) XP® Rabbit mAbS-2/iS  一氧化氮合成酶-2抗体（诱导型）

正丁硫(standard for GC,≥99%(GC))Lck (D88) XP® Rabbit mAbS-2/iS  一氧化氮合成酶-2抗体（诱导型）

乙酸仲丁酯(standard for GC, ≥99.5% (GC))Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjugate)nylphel  壬基酚抗体

甲酸丁酯(Standard for GC)CNPase Antibodynstructural protein 1/NS1  A型流感病毒-NS1抗体（神经氨酸酶1）

一正丁胺(Standard for GC,≥99.7%(GC))Transthyretin (D8T4Q) Rabbit mAbn-muscle Myosin IIA  非平滑肌肌球蛋白2A抗体

仲丁(Standard for GC,≥99.8%(GC))RANTES (R40) AntibodyL8  核仁蛋白8抗体

联苯(Standard for GC,>99.5%(GC))RANTES (P20) AntibodyL1  增殖相关核仁抗原抗体
马毛癣菌PCR检测试剂盒规格宿主细胞因子1抗体Enmein中文名：延命素别名：延命草素分子式：C20H26O6

组蛋白H2A/S抗体Carpalasionin中文名：别名：分子式：C22H28O8

HDHD1蛋白抗体Excisanin A中文名：别名：分子式：C20H30O5

HDHD2蛋白抗体rcaesalpinin E中文名：别名：17-rbonducellpin C分子式：C21H28O6

羟基酰谷胱甘肽解酶样蛋白抗体Tispiside C中文名：别名：分子式：C27H36O12
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。