注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Gum benzoin二酸 AR,99.5%磷钨酸 AR

Borneol二酸 CP,98%1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%

Abietic acid二酸 分析标准品碳酸烯酯 99%

Cyanuric chloride叠氮磷酸二苯酯  97% 碳酸烯酯 CP

2-VP叠氮基*基硅烷 93%碳酸烯酯 for HPLC, 99.7%

1,1,2-Trichlorotrifluoroethane3-溴酸 98%碳酸烯酯 99.7%,无级

Ethyl ferulate异酸氯磺酰酯 98%对甲氧基苯胺 97.0%

Soybean oil三聚氯 99%对甲氧基苯胺 AR，99.0%

Pentetrazol1,3-二氨基胍盐酸盐 97%对甲 98%

Ellagic acid基氢钠 95%对氨基酚 CP，98%

PVF二胺钠 96%对氨基酚 99% (HPLC)

Uric acid基氢钠 1.0 M in THF间氯 CP,98%

Pyrene基氢钠 5.0 M in 1 M NaOH间氯 GR，99%

3-Methyl-1,2-cyclopentanedione硫酸亚铁，七 AR邻氯 GR,99%

Propylthiouracil硫酸亚铁，七 99.99% metals basis邻氯 GCS，>99.5% (GC)

Tangeretin硫酸镁，七 AR,99.0%邻氯 CP,98%

舒缓激肽三醋酸盐Citrate Synthase (D7V8B) Rabbit mAbPKMYT1  髓鞘转录因子1激酶抗体

α-促黑激素,黑素皮质素Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb (Pacific Blue^™ Conjugate)PKC-γ/SCA14  蛋白激酶C亚型G抗体

内皮素-1，人，猪E4BP4/NFIL3 (D5K8O) Rabbit mAbPKC epsilon  蛋白激酶C抗体

蛙皮素,胃泌素C-Reactive Protein (D1N1U) Rabbit mAbPKC delta  蛋白激酶C亚性D型抗体

血管活性肠肽NAE1/APPBP1 (D9I4Z) Rabbit mAbPKC beta 1/2  蛋白激酶C beta 1/2抗体

焦碳酸二乙酯Spi-B (D3C5E) Rabbit mAbPKC alpha  蛋白激酶C α抗体

DEPC;焦碳酸二乙酯(sigma)NFAT1 (D43B1) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)PKB/AKT-1  蛋白激酶B

琼脂糖(Biowest,电泳级);西班牙琼脂糖TRIM5α (D6Z8L) Rabbit mAbPKA/PKAcat/PKACB  蛋白激酶A抗体

烯酰胺(超纯)GCKR (D1W9P) Rabbit mAbPKA regulatory subunit I beta  蛋白激酶受体相关1β抗体

聚乙二400Phospho-GSK-3β (Ser9) (D85E12) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PKA R2/PKA IIα  蛋白激酶A受体2α亚基抗体
白垩立克次氏体PCR检测试剂盒说明书兔抗脑组织抗体(ABAb)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

兔抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

兔抗糖蛋白抗体(GP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

兔可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

兔淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

兔内皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃250毫克

兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。