注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
PhenazineN-2-羟乙基哌-N'-2-乙磺酸  99%4-三氟甲氧基苯胺 99%

PZ鲁米诺 98%苄基酮 98%

Squalene3-(N-啉)磺酸钠 99.5%(T)氧化铪(IV)  99.99% metals basis

1-OctadeceneN，N′-亚甲基双烯酰胺 CP,97% Standard for GC

1-TetradeceneN，N′-亚甲基双烯酰胺 for electrophoresis, ≥99.0% (T)溶液 AR，30-33 wt. % in absolute ethal

1-UndeceneN，N′-亚甲基双烯酰胺 for molecular biology, ≥99.0% (T)溶液 CP，30-33 wt. % in absolute ethal

NSA 吗啉乙磺酸,一 分子生物学级, ≥99% (T)2-氨基-2-甲基-1- 97%

MA3-(N-啉)磺酸 99%碳酸氢 AR,99.5%

Phthlandione吗啉乙磺酸钠盐 99%无碳酸 AR，99%

Dodecenylsuccinic anhydride6-甲氧基喹啉 96%无碳酸 GR，99.5%

HHPA3-甲基-2-苯并噻唑酮腙盐酸盐，合 98%无碳酸 PT

Nadic anhydride酚试剂 AR,98.0%无碳酸 SP

SAA3-吗啉-2-羟基磺酸 99%无碳酸 99.99% metals basis

TCPA3-吗啉-2-羟基磺酸钠 99%无碳酸 99.995% metals basis

2-Methylbenzothiazole氯化硝基四氮唑蓝 98%无碳酸 ACS, ≥99.0%

5-Nitrobenzimidazole氯化硝基四氮唑蓝 分子生物学级硝酸 AR,99.0%

化木兰花碱Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb (HRP Conjugate)PPT1  棕榈酰蛋白硫酯酶1抗体

去甲乌药碱盐酸盐(标准品)Acetyl-Histone H3 (Lys9) (C5B11) Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPP4C  丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶4C抗体

去甲乌药碱盐酸盐Phospho-Doublecortin (Ser334) (D11B10) Rabbit mAbPPP2R3A  蛋白质磷酸酶2调节亚基3A抗体

二氢欧山芹素 (标准品)Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPP2R3  蛋白质磷酸酶2A亚基3抗体

异泽兰黄素（标准品）B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAbPPP2R1B  蛋白质磷酸酶2调节亚基1B抗体

利莫那班羧酸B7-H3 (D9M2L) XP® Rabbit mAbPPP2R1A  蛋白质磷酸酶2调节亚基1A抗体

玉米黄质Stat3 (D3Z2G) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PPO  腺样癌特异性相关抗原PPO抗体

三亚乙基硫代磷酰胺Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAbPPM2C  蛋白磷酸酶2C抗体

普拉克索碱Lyric/Metadherin (D5Y8R) XP® Rabbit mAbPPM1G  蛋白质磷酸酶1G抗体（PP2Cγ）

普拉克索碱（标准品）SUMO-2/3 (18H8) Rabbit mAb (HRP Conjugate)PPM1F  钙调蛋白依赖性蛋白激酶磷酸酶抗体
真鲷虹彩病毒PCR检测试剂盒说明书人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

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人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子(TWEAK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。