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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 牛赤羽病病毒PCR检测试剂盒规格 |
英文名称 | Akabane Disease Virus(ADV)RTPCR |
货号 | LZP6356 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
人S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)elisa试剂盒Anti-BID Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 细胞分化 表观遗传学
人ras同源物基因家族成员b(RHOB)elisa试剂盒Anti-BID Antibody研究领域 细胞生物 发育生物学 神经生物学 信号转导 转录调节因子 表观遗传学
人CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)elisa试剂盒Anti-BIRC3 Antibody研究领域 发育生物学 神经生物学 细胞分化
人alpha突触核蛋白(淀粉样前体非A4成分蛋白)低聚物elisa试剂盒Anti-BIK Antibody(原货号PB0802)研究领域 肿瘤 神经生物学 信号转导 表观遗传学 细胞膜蛋白
鸡弓形虫循环抗原(TCA)elisa试剂盒Anti-BID Antibody(原货号PB0015)研究领域 细胞生物 神经生物学
鸡催乳素(PRL/LTH)elisa试剂盒Anti-BIRC2 Antibody研究领域 细胞生物 发育生物学 神经生物学 信号转导 干细胞 转录调节因子 表观遗传学
鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa试剂盒Anti-BIRC5 Antibody研究领域 心血管 细胞生物 神经生物学 细胞分化
大鼠可溶性Toll样受体2(sTLR2)elisa试剂盒Anti-BIRC5 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 通道蛋白 细胞膜蛋白
大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)elisa试剂盒Anti-BIRC5 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 新陈代谢 G蛋白信号
大鼠抗血小板抗体(IgM)elisa试剂盒Anti-BIRC5 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 新陈代谢 G蛋白信号
大鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)elisa试剂盒Anti-BIRC5 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 合成与降解 G蛋白信号
大鼠角化细胞生长因子(KGF)elisa试剂盒Anti-BIRC7 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 细胞膜受体 G蛋白偶联受体 G蛋白信号 细胞膜蛋白
大鼠基质金属蛋白酶14(MMP-14)elisa试剂盒Anti-BMI1 Antibody研究领域 信号转导 干细胞 细胞骨架 细胞外基质
大鼠肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)elisa试剂盒Anti-BMI1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学
大鼠红细胞生成素受体(EPOR)elisa试剂盒Anti-BIRC7 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 通道蛋白
WortAgar
m-TGE肉汤 250(g) incubation media m-TGE肉汤 250(g)
山梨醇麦康凯琼脂平板 Sorbitol Maconkey Agar Plate 10块
卵黄琼脂培养基基础250肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养(GB标准)incubationmedia卵黄琼脂培养基基础250肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养(GB标准)
副溶血性弧菌琼脂 250g 副溶血性弧菌的选择性分离培养
SC增菌液 Selenite Cystine Broth 250克 沙门氏菌选择性增菌培养
SE增菌液 Selenite Enrichment Medium 250克 增殖标本中的沙门氏菌
亮绿琼脂 Brilltant Green Agar 250克 沙门氏菌分离培养
亮绿增菌液 Brilltant Green Enrichment Broth 250克 蛋与蛋制品中沙门氏菌检验
牛赤羽病病毒PCR检测试剂盒规格小鼠胚胎细胞,NIH/3T3细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
小鼠前胃癌细胞,MFC细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
小鼠癌高转移细胞,MA-891细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
小鼠癌细胞,4T1细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
小鼠神经胶质瘤细胞,G422细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
小鼠肾癌细胞,RENCA细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。