宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)

试剂盒简介：

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒(磁珠法)用于样本的前处理，可稳定高效地提 取出样本中残留的痕量宿主 DNA。

试剂盒组分：

有效期： 12 个月

宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒实验流程(手工操作)：

注： 在开展实验前， 请用精密 pH  试纸条测定样本的 pH 值并将样本 pH 值调节至 6-8.

实验准备

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样本准备

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样本消化

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DNA 捕获

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洗涤

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DNA 洗脱

实验操作细则：

一、 样本处理：

1.   取 100ul 待检样本至 1.5ml 干净的离心管中，加入 10ul 5M  NaCl  溶液，用涡旋      振 荡器充分震荡 10 秒；

2.   加入 10ul 蛋白酶 K，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒；

3.  配制新鲜的裂解液，其组成为： 130ul  裂解液/100ul  样本， 9ul  肝糖原/100  样本， 0.2ul tRNA/100ul 样本，充分混匀以制成新鲜配制的裂解液；

4.  将 139ul 新鲜配制的裂解液加入到样本管中， 然后用涡旋振荡器充分震荡 10 秒， 取出短 暂快速离心 5 秒，然后放置在 56oC 孵育 30 分钟；

二、 DNA 捕获：

1.     将磁珠充分涡旋振荡以*重悬；

2.     将样本管从孵育器中取出， 进行简短的离心，将液体收集到管底，然后加入*重悬的 磁珠 60ul 和 230ul 结合液，在涡旋振荡器上充分震荡 10 秒； (注意： 在加入磁珠时， 需经 常振荡重悬磁珠， 以保证吸取时磁珠的均匀性。建议每加 3-4 组样本后， 重悬磁珠后再进行 后续样本的添加)

3.    将震荡后的样本管，置于旋转混匀器或涡旋振荡器上 10 分钟以进行磁珠捕获；

4.     将样本管从旋转混匀器上取下，在 10000g 的条件下离心 1 分钟使磁珠充分聚集；

5.     将离心后的样本管置于磁力架上， 待溶液*澄清后， 用枪头小心移去上清(注： 避免 枪头搅动磁珠，使得磁珠同上清一起被除去从而影响得率)；

三、宿主细胞残留 DNA 样本前处理试剂盒 洗涤：

1.     样本管移去上清后，不必将样本管从磁力架上取下，直接加入 400ul 洗涤液；

2.     待溶液*澄清后，磁珠*分离，用枪头小心移去上清；

3.     保持样本管在磁力架上， 加入 400ul 洗涤液， 待溶液澄清， 磁珠*分离后， 用枪头小 心移去上清；

4.     将样本管从磁力架上取下， 于 10000g 的条件下离心 30 秒，使得残留的洗涤液*聚集 到管底；

5.   将样本管置于磁力架上，待磁珠*分离后，用 10ul 枪头小心移除残留的液体；

6.     将样本管从磁力架上取下，置于 70oC 金属浴中，放置 4 分钟， 除去残留的乙醇(注： 若干燥不够， 残留的乙醇会影响后续的定量检测反应)；待磁珠团出现裂纹时，将样本管从 金属浴中取出进行 DNA 洗脱；

四、 DNA 洗脱：

1.     沿着样本管的管壁加入 50- 100ul 洗脱液，用 100ul 的枪头反复吹吸，以*重悬磁珠；

2.     将样本管置于 70oC 孵育器孵育 10 分钟；

3.   将样本管从孵育器中取出，于 20000g 离心 2 分钟，然后至于磁力架上，待磁珠*分 离后，用 10ul 枪头小心将上清液体转移至新的干净的离心管中；

4.    为了避免吸入磁珠，在离心管中还剩余少量液体时，将其于 20000g 离心 2 分钟，然后 至于磁力架上以吸出剩余的液体。

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