小鼠ELISA试剂盒采用双抗体夹心法，单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的小鼠试剂会与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠试剂抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合;抗小鼠试剂抗体与结合在单抗上的小鼠试剂结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，若反应孔中有小鼠试剂，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450 nm处测OD值，小鼠试剂浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中小鼠试剂的浓度。