PCR扩增试剂盒的标准品（冻干品）临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释，分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔0 U/L。如配制100 U/L标准品则取0.3ml（不要少于0.3ml）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
PCR扩增试剂盒使用时要注意基础程序、扩增温度和延伸温度、反应时间、循环次数、PCR反应液的配制、PCR的反应动力学、PCR扩增产物以及PCR反应体系与反应条件。
若在进行PCR实验时扩增产物出现杂带该如何处理？
对于该现象可能的原因和对应的处理策略如下：
1.引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。
2.循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。
3.酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。
4.退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的PCR扩增。以2℃为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。
5.样品处理不当。
6.Mg2+浓度偏高，因适当调整Mg2+使用浓度。
7.若为PCR试剂盒，也可能时试剂盒本身质量有问题。推荐使用PCR扩增试剂盒，添加改良的DNA聚合酶，大大提高扩增产物的特异性和保真性。
更新时间：2022-08-23 
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